A

 

PPD-A를 사용하는 이유는 M. bovis와 항원을 공유하는 유사 결핵균을 감별하기 위해서입니다. 

따라서 PPD-B와 PPD-A 흡광도 수치가 모두 높아져 있고, 서로의 흡광도 값의 차이가 0.1 이하라면 소 결핵이 아닌 유사결핵균 감염으로 추정됩니다. 

인서트에 안내되어 있는 대로 B-A와 B-P가 모두 0.1 이상인 경우만 소 결핵으로 진단합니다.

 

A

 

본 키트는 개체의 세포성 면역 반응을 통해 소 결핵을 진단하는 키트입니다. 따라서 최근에 Dexamethasone 치료를 받았거나, 송아지를 분만하거나, 

또는 면역억제를 일으키는 질병에 감염된 경우, 면역 억제 현상이 나타나 PPD 항원에 대한 IFN-γ 반응이 저해될 수 있습니다. 

 

따라서 1주일 이내에 Dexamethasone을 주사 받았거나, 혹은 분만한 송아지가 4주령 이내이면 위음성 결과가 발생할 수 있으며, 시간이 지난 후 다시 채혈하여 검사하여야 합니다.

 

A

 

BTB Ab ELISA (Bovine Tuberculosis Antibody ELISA)는 바이오노트에서 출시한 소 결핵에 대한 항체 ELISA 키트입니다. 

소 결핵은 다른 질병에 비해 체액성 면역 반응이 늦게 나타나 항체가 형성되는데 시간이 오래 걸립니다. 따라서 세포성 면역을 이용하는 피내접종법과 IFN-γ 검사법이 우선적으로 소 결핵 진단에 사용됩니다. 

소 결핵이 아직 많이 진전되지 않은 경우, IFN-γ 검사법은 양성, BTB Ab 검사는 음성이 나올 수 있습니다. 

하지만 소 결핵 후기로 갈수록 세포성 면역 반응이 떨어지기에 피내접종법과 IFN-γ 검사로 음성이 나올 수 있습니다. 

이런 개체에 대해서 BTB Ab 검사를 진행하여 양성 개체를 잡아내면 더 효과적인 소 결핵 근절이 가능합니다. 이런 경우, IFN-γ 음성, BTB Ab 양성이 나올 수 있습니다.

 

따라서 채혈 시기와 결핵 감염 시기에 따라 두 검사 키트 사이에 소 결핵에 대한 판정이 불일치할 수 있습니다.

 

A

 

자극 항원으로 감작 처리된 혈장 검체를 이용하여 바이오노트의 다른 ELISA 키트 실험도 가능합니다. 

PBS를 처리한 혈장 검체를 이용하여 BTB Ab ELISA, FMD NSP Ab ELISA, B.Brucella Ab ELISA 등 검사를 진행하면 됩니다.. 

 

A

 

본 키트는 소 결핵의 원인체인 M. bovis에 노출되었던 T림프구에 의해 분비되는 IFN-γ를 검출하는 키트입니다. 

따라서 소의 IFN-γ에 특이적인 단클론 항체를 이용하고 있습니다. 축종 별 IFN-γ 단백질의 homology가 다를 수 있고, 다른 축종에 대해서 본 키트가 평가된 데이터가 따로 없기 때문에, 

본 키트로 다른 축종의 결핵 검사를 진행할 경우, 결과를 보증할 수 없습니다.

 

A

 

일반적으로 6개월 이상의 모든 개체는 IFN-γ 검사가 가능합니다. 6개월 이하의 어린 개체는 아직 면역 시스템이 발달 중이기 때문에 비특이 반응이 나타나 결과에 영향이 있을 수 있습니다. 

‘결핵병 및 브루셀라병 방역실시요령’ 제3조(검사대상 가축 등)에는 소 결핵 검사 대상 소는 생후 12개월 이상의 소로 되어있고, 

6개월 이상 12개월 미만의 소는 가축방역관이 방역상 필요하다고 판단하는 경우 검사할 수 있는 것으로 되어있습니다.

 

A

 

실험 완료된 ELISA 플레이트를 리더기에 넣으면, 리더기가 측정파장 450 nm (노란색)과 참조 파장 620 nm (파란색)를 이용하여 흡광도 값을 읽습니다. 

그 후, 450 nm로 읽은 흡광도 값과 620 nm로 읽은 흡광도 값의 차를 최종 흡광도 값으로 계산합니다. 

참조 파장은 기본 값을 빼주는 개념으로, 일반적으로 ELISA 실험 후 620 nm로 읽은 값은 매우 작습니다. 

 

따라서 ELISA 리더기가 620nm를 읽을 수 없는 경우, 450 nm로만 읽어서 결과를 확인해도 결과적으로 큰 차이는 없습니다. 하지만 가능하다면 측정파장과 참조파장으로 모두 읽어서 결과를 계산해야 합니다.

 

A

 

TMB 기질액은 접합체액 내에 들어있는 효소와 반응하여 투명한 색에서 푸른색으로 변하게 됩니다. 아직 TMB 기질액을 사용하지 않았는데, 

푸른색이 나타나 있다면 시약병이 오염된 것으로 판단되며, 결과에 영향을 미칠 수 있으므로 사용해서는 안 됩니다. 

검사를 진행하고 남은 시약을 다시 시약병 안에 넣으면 그로 인해 오염이 발생할 수 있기에 시약병에서 필요한 만큼만 덜어서 사용해야 합니다.

 

A

 

이전 ELISA 실험에 사용한 리저버를 재사용하여 본 키트 검사를 진행할 경우, 비록 세척을 하였을지라도 남아있을 수 있는 여러 물질에 의해 시약이 오염되고 실험 결과에 영향을 줄 수 있습니다. 

리저버는 일회용이기에 본 키트 검사를 위해 새 리저버를 사용해야 합니다.

 

A

 

배양 후 원심분리를 하여 수거된 혈장 검체를 당일에 키트 검사로 사용하지 않을 경우, 2~8℃에서 7일간 보관이 가능합니다. 그리고 -20℃에서는 2~3 개월간 보관이 가능합니다. 

단, ELISA 실험을 진행하기 전에 실온 (18~25℃)에 15~30분 정도 두고, Vortexing을 진행한 후 실험해야 합니다.